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生物素衍生物的標(biāo)記及其產(chǎn)物的檢測(cè)原理
更新時(shí)間：2017-07-07
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生物素衍生物的標(biāo)記及其產(chǎn)物的檢測(cè)原理
一、生物素簡(jiǎn)介
生物素（biotin，B）分子量244．31D．生物素分子有兩個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)，其中Ⅰ環(huán)為咪唑酮環(huán)，是與親和素結(jié)合的主要部位；Ⅱ環(huán)為噻吩環(huán)，C2上有一戊酸側(cè)鏈，其末端羧基是結(jié)合抗體和其他生物大分子的*結(jié)構(gòu)，經(jīng)化學(xué)修飾后，生物素可成為帶有多種活性基團(tuán)的衍生物——活化生物素。
二、生物素衍生物簡(jiǎn)介
1、常見的標(biāo)記方法
| 標(biāo)記方法 | 舉例 | 說明 |
| 標(biāo)記蛋白質(zhì)氨基
| 生物素羥基琥珀酰亞胺酯（BNHS）★ | 適用于標(biāo)記抗體和中性或偏堿性的蛋白質(zhì) |
| 長(zhǎng)臂活化生物素（BCNHS）
| 添加兩個(gè)6-氨基己糖，形成連接臂 | |
| 標(biāo)記蛋白質(zhì)醛基 | 生物素酰肼（BHZ） | 標(biāo)記偏酸性糖蛋白 |
| 肼化生物胞素（BCHZ） | 除醛基外，還可標(biāo)記氨基 | |
| 標(biāo)記蛋白質(zhì)巰基 | 馬來酰亞胺-丙酰-生物胞素（MPB） | |
| 標(biāo)記核酸 | 光生物素 | 側(cè)鏈芳香基疊氮物，光照后，變?yōu)榉枷慊趸?/td> |
| 生物素脫氧核苷三磷酸（Bio-dUTP） | ||
| BNHS和BHZ直接標(biāo)記核酸 | 對(duì)堿基配對(duì)有影響 |
★對(duì)抗原、抗體標(biāo)記后活性不變；可對(duì)標(biāo)記材料（如酶）標(biāo)記，但堿性磷酸酶標(biāo)記后活性將降低。
2、常見的生物素衍生物結(jié)構(gòu)及其性質(zhì)
三、生物素標(biāo)記產(chǎn)物的檢測(cè)
1、檢測(cè)原理：
親和素（avidin，AV）亦稱抗生物素蛋白、卵白素，是從卵白蛋白中提取的一種由4個(gè)相同亞基組成的堿性糖蛋白，分子量為68kD，等電點(diǎn)pI=10.5；耐熱井耐受多種蛋白水解酶的作用．尤其是與生物素結(jié)合后，穩(wěn)定性更好。每個(gè)親和素能結(jié)合4個(gè)分子的生物素，二者之間的親和力*，親和素常數(shù)（K）為10^15 l/mol，比抗原與抗體間的親和力（K＝10^5～10^11 L/mol）至少高1萬(wàn)倍，二者的結(jié)合特異性高和穩(wěn)定性好。因此，可以用標(biāo)記HRP或熒光素的親和素或鏈霉親和素去檢測(cè)生物素的標(biāo)記產(chǎn)物。
2、檢測(cè)方法舉例：
1）熒光標(biāo)記的親和素進(jìn)行熒光檢測(cè)
2）標(biāo)記親和素-生物素ELISA檢測(cè)法（LBA法）
3）橋接親和素-生物素ELISA檢測(cè)法（BAB法）
4）親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物ELISA檢測(cè)法（ABC法）
5）標(biāo)記鏈霉親和素-生物素ELISA檢測(cè)法（LSAB法）
