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qPCR結(jié)果都不一樣?這些技巧你需要掌握!
簡介實時熒光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR)也稱QPCR,是指在DNA擴增應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測單次聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。原理與操作QPCR技術(shù)實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,以特異性強、重復(fù)性好、定量準確、可實時監(jiān)測等優(yōu)點成為了分子生子生物學(xué)研究中常用工具。QPCR自1983年發(fā)明以來,經(jīng)過數(shù)次更新迭代,到如今在實驗中廣泛運用,做過qPCR(熒光定量PCR)的小伙伴,可能會遇到這樣的問題,明明已經(jīng)按照文獻的方法,照搬PC...
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化學(xué)發(fā)光所需的抗體抗原
化學(xué)發(fā)光是免疫診斷當(dāng)中,目前在臨床上應(yīng)用最為廣泛,技術(shù)最為先進的技術(shù)手段之一,其主要利用抗原與抗體的免疫反應(yīng),在發(fā)光底物的激發(fā)下,發(fā)出光信號,達到對待測樣本進行定量或者半定量的檢測方法。其中抗原抗體是化學(xué)發(fā)光試劑最為核心,最為重要的原料,其質(zhì)量直接影響試劑的質(zhì)量。在進行化學(xué)發(fā)光試劑研發(fā),如何選擇抗原抗體,其質(zhì)量評價指標(biāo)有哪些,本文帶你了解抗體的那些事兒。什么是化學(xué)發(fā)光法?“化學(xué)發(fā)光”一詞是由EilhardtWeidemann(1888年)提出的?;瘜W(xué)發(fā)光,是指當(dāng)外源性反應(yīng)的振...
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單克隆抗體和多克隆抗體之間的區(qū)別
抗體是免疫蛋白質(zhì),在宿主對病毒、細菌和真菌等感染性病原體的防御中發(fā)揮著基本作用。這些Y型蛋白質(zhì)的免疫功能是由其結(jié)合抗原的能力決定的,抗原是由細胞釋放的或在細胞上發(fā)現(xiàn)的刺激免疫反應(yīng)的分子。除了在宿主免疫中的作用,抗體在研究和治療方面也被證明是有價值的。兩種類型的抗體,多克隆抗體和單克隆抗體為研究人員提供了檢測或量化目標(biāo)抗原的不同方法,主要是由于特異性和親和力的不同。在這篇文章中,我們將更詳細地描述多克隆抗體和單克隆抗體,并考慮每種類型如何用于各種應(yīng)用。什么是多克隆抗體?而多克隆...
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細胞百科之神經(jīng)元細胞
神經(jīng)元細胞英文名稱:neuron分類:突起分為樹突和軸構(gòu)成:復(fù)層扁平上皮研究史:19世紀初功能:接受刺激,產(chǎn)生興奮并傳導(dǎo)興奮神經(jīng)元細胞指有突起的細胞,它由細胞體和細胞突起構(gòu)成。細胞體位于腦、脊髓和神經(jīng)節(jié)中,細胞突起可延伸至全身各器官和組織中。細胞體是細胞含核的部分,其形狀大小有很大差別,直徑約4~120微米。核大而圓,位于細胞中央,染色質(zhì)少,核仁明顯。細胞質(zhì)內(nèi)有斑塊狀的核外染色質(zhì)(舊稱尼爾小體),還有許多神經(jīng)元纖維。細胞突起是由細胞體延伸出來的細長部分,又可分為樹突和軸突。每...
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細胞學(xué)堂 | 293細胞系家族譜系大揭秘
HEK293細胞的起源HEK293細胞的歷史可以追溯到1973年,當(dāng)時荷蘭萊頓大學(xué)的AlexVanDerEb博士和FrankGraham博士在研究人類腺病毒(Adenovirus)時培養(yǎng)了這種細胞,細胞命名中的數(shù)字可以追溯到他的第293次實驗產(chǎn)生的原始細胞克隆這一事實。通過腺病毒5(Ad5DNA)進行了轉(zhuǎn)染,由于存在Ad5E1A/B基因,使其細胞周期以及細胞表型、核型等發(fā)生了改變,獲得永生化特性,在生產(chǎn)腺病毒載體和腺相關(guān)病毒載體、生產(chǎn)蛋白、疫苗、抗癌試劑以及細胞生物學(xué)研究上廣...
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IL-2:具有免疫刺激和調(diào)節(jié)的多效細胞因子
IL-2是一種多面細胞因子,根據(jù)細胞類型和狀態(tài),可促進細胞增殖、存活和死亡。例如,當(dāng)抗原和IL-2豐富時,IL-2僅在激活的T細胞中促進細胞死亡。IL-2的可用性明顯影響這一過程。IL-2通過硫酸肝素滯留在血管中,具有生物活性的IL-2通過肝素酶從血管組織釋放出來。二聚體IL-2誘導(dǎo)的細胞形態(tài)學(xué)改變和細胞快速死亡暗示細胞死亡是由細胞膜通透性破壞和隨后的壞死介導(dǎo)的。IL-2對免疫系統(tǒng)和非免疫系統(tǒng)[1]的細胞穩(wěn)態(tài)機制有直接和廣泛的影響。1.IL-2生物背景IL-2是第一個被克隆的...
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IL-1β:天然免疫的促炎細胞因子
前言白介素IL-1家族的細胞因子和受體在免疫學(xué)上是獨以無額,因為與其他細胞因子家族相比,IL-1家族主要與先天免疫有關(guān)。有超過95%的生物體利用先天免疫機制生存,僅有不到5%的生物體依賴T細胞或B細胞功能。先天免疫的表現(xiàn)為炎癥,炎癥是宿主的一種防御機制。IL-1家族細胞因子通過IL-1受體觸發(fā)先天炎癥,在先天免疫中占主導(dǎo)地位,但IL-1家族也可以在獲得性免疫中發(fā)揮作用。IL-1家族介紹目前,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的白介素IL-1家族包含12個成員:IL-1α,IL-1β,IL-1受體拮抗劑...
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抗體的結(jié)構(gòu)詳解
抗體,也叫免疫球蛋白(Ig),是一種能特異性結(jié)合抗原的糖蛋白,而抗原是在易感染動物體內(nèi)引發(fā)抗體產(chǎn)生的物質(zhì)。在體內(nèi),抗體是由于外源性分子的侵襲而產(chǎn)生的??贵w以一個或者多個Y字形單體存在,每個Y字形單體由4條多肽鏈組成,包含兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈。輕鏈和重鏈是根據(jù)它們的分子量大小來命名的。Y字形結(jié)構(gòu)的頂端是可變區(qū),為抗原結(jié)合部位。任何一個抗體的輕鏈都可以分為κ或λ型(基于小分子多肽結(jié)構(gòu)上的差異),每一個抗體的重鏈則決定了它的類或型??贵w分類根據(jù)抗體大小和功能的差異,可以將...
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怎么避免實驗遭受抗體災(zāi)難?抗體選擇指南送給你?
抗體問題一直困擾著廣大科研工作者,抗體市場魚龍混雜,雖然是一個名字但是每個對應(yīng)的質(zhì)量都是不同的,今天給大家分享一些抗體選擇的經(jīng)驗~檢測任何目的靶蛋白都不止一種抗體可供選擇,為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體,需要考慮如下幾種因素:1、分析或應(yīng)用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種分析類型,如:可以應(yīng)用于WBIHCICCELASA分析等,如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型,而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗驗證,如果抗體不適...
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什么是抗體?
一、什么是抗體?抗體(antibody,Ab)是由效應(yīng)B細胞(效應(yīng)淋巴B細胞)分泌,機體用于抵御外來物質(zhì),如病毒,細菌等抗原,結(jié)構(gòu)呈“Y”字型的球狀蛋白質(zhì),僅僅存在于脊椎動物的血液和B淋巴細胞膜表面。凡是能夠跟抗體結(jié)合的物質(zhì),均被稱作抗原,因此對于抗抗體(能夠結(jié)合抗體的抗體)來說,抗體本身也是一種抗原物質(zhì)。圖1抗體-抗原結(jié)合示意圖:antibody,抗體;pathogen,病原體;antigen,抗原二、抗體的結(jié)構(gòu)2.1普通抗體重鏈和輕鏈的結(jié)構(gòu)重鏈結(jié)構(gòu):普通的免疫球蛋白具有2...
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如何養(yǎng)好細胞?細胞培養(yǎng)技巧分享
對于養(yǎng)細胞的人來說可謂是談“污”色變每次養(yǎng)細胞總讓人精神錯亂打開培養(yǎng)皿的那一刻連呼吸都是如此多余只要有任何的異樣無論是支原體還是雜菌污染/污染/污染猶如細胞實驗的魔宙讓一切都無限重復(fù)那么如何將失敗率降到更低,讓我們擺脫玄學(xué)的定律呢?今天專門為大家盤點了細胞培養(yǎng)超實用干貨一、細菌污染細菌污染最為常見,一旦操作稍有不當(dāng),就會引起細胞污染,細菌污染后顯微鏡下觀察呈現(xiàn)有黑色細條沙狀,當(dāng)然,根據(jù)感染的細菌不同,所呈現(xiàn)的狀態(tài)也不盡相同,有球形、桿狀等,其次,培養(yǎng)液發(fā)黃,變渾濁,可明顯看見...
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細胞干貨|讓你的細胞狀態(tài)迎接轉(zhuǎn)染
細胞轉(zhuǎn)染對初接觸細胞實驗的科研人員而已,是一道難過的坎兒,細胞傳染率低的話,你珍貴的細胞可能就只能扔掉了。不過俗話說的好,術(shù)業(yè)有專攻,如果碰到自己沒接觸過的一些細胞培養(yǎng)的領(lǐng)域,而恰好這個領(lǐng)域又有些上手的難度,可能難免會走一些彎路,轉(zhuǎn)染的效率也會不理想。那么今天小編帶大家終結(jié)一下:幾種常見的傳染方法1、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法:陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過靜電作用,將DNA分子包裹入內(nèi),形成DNA脂復(fù)合物,也能被表面帶負電的細胞膜吸附,再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞。脂質(zhì)體...
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